Western-blot样品处理注意事项

样品处理及保存

1、悬浮细胞样品：

把细胞及培养液一起收集到15ml或者50ml离心管中，1500rpm离心3min，弃去上清；加入10ml 冷PBS轻轻吹打，1500rpm，4℃离心3min，弃去上清；反复2次；第二次弃去上清后，用1ml 冷PBS重悬细胞，移入1.5ml微型离心管，2500rpm（500g），4℃离心5分钟，尽量去除所有残留上清，于-80度或者液氮冻存待用。在避免冻融的情况下，一般保存1年，建议尽快检测。

2、贴壁细胞样品：

2.1胰酶消化：

用胰酶将细胞消化后，含血清的培养基中和胰酶，吹打，收集到15ml或者50ml离心管中，1500rpm离心3min，弃去上清；加入10ml 冷PBS轻轻吹打，1500rpm，4℃离心3min，弃去上清；反复2次；第二次弃去上清后，用1ml 冷PBS重悬细胞，移入1.5ml微型离心管，2500rpm（500g），4℃离心5分钟，尽量去除所有残留上清，于-80度或者液氮冻存待用。在避免冻融的情况下，一般保存1年，建议尽快检测。

2.2细胞刮子收集细胞：

对于某些蛋白（即对胰酶比较敏感或者实验特殊要求，如E-Cadherin不易用胰酶消化后进行WB检测），直接用细胞刮子刮下细胞，连同培养基收集到15ml或者50ml离心管中，1500rpm离心3min，弃去上清；加入10ml 冷PBS轻轻吹打，1500rpm，4℃离心3min，弃去上清；反复2次；第二次弃去上清后，用1ml 冷PBS重悬细胞，移入1.5ml微型离心管，2500rpm（500g），4℃离心5分钟，尽量去除所有残留上清，于-80度或者液氮冻存待用。在避免冻融的情况下，一般保存1年，建议尽快检测。

3、动物组织样品：

取下合适的动物或者人的组织样品后用预冷的PBS或者生理盐水漂洗，尽量除尽残留血液，用滤纸把多余PBS吸取干净。把组织分成约50mg大小（依据实验目的需要进行调整），用锡纸分别包装好或者用冻存管装好，于-80度或者液氮中保存。在避免冻融的情况一般保存1年，建议尽快检测。

4、植物样品：

取得待测植物样品后，用蒸馏水把泥土漂洗干净，用滤纸把多余水分吸取干净，分装成合适大小于-80度或者液氮中保存。在避免冻融的情况一般保存1年，建议尽快检测。

5、细菌样品：

细菌培养完成后，10000rpm离心5min收集细菌，加入PBS吹打，10000rpm离心5min，弃去上清；反复3次，弃去上清后于-80度或者液氮冻存待用。

6、若要检测磷酸化蛋白，请在3个月内进行。

长时间保存样品容易使磷酸化蛋白去磷酸化而检测不到磷酸化条带。

7、提取胞浆、胞核蛋白的样品应尽量采用新鲜样品

因为冻存会使细胞浆、细胞核破裂。

8、血液样品（血浆中蛋白）

3000rpm离心20min后收集上清，分装后于-80度或者液氮冻存待用。3个月以内检测。

9、运输时间较长或长距离运送样品时采用干冰或者液氮。