常见问题解惑---慢病毒

一、慢病毒是什么？

慢病毒是逆转录病毒的一种，具有逆转录病毒的基本结构和特性：整合入宿主细胞基因组，长期表达，可用于转基因动物制备；但也有不同于逆转录病毒的组份和特性：比逆转录病毒具有更高的滴度，不仅可以感染分裂期细胞，更重要的，还能感染非分裂期的细胞。

吉凯提供的慢病毒为“自杀”性病毒，即病毒感染目的细胞后不会再感染其他细胞，也不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒。慢病毒中的毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，属于假型病毒。但该病毒仍然具有可能的潜在的生物学危险

二、慢病毒如何稀释？

慢病毒使用时，先将病毒从-80℃冰箱取出，冰浴融化，可使用D-hanks，PBS，生理盐水或培养基进行稀释。

三、慢病毒生物安全性如何？

重组慢病毒的生物安全等级被确定为II级，需要在生物安全级II级的条件下进行慢病毒操作实验。

四、慢病毒如何保存？慢病毒的滴度单位是什么？

慢病毒长期保存则需放置于-80℃或更低温度的环境中。在-80℃环境中慢病毒可以稳定存放6个月以上。尽可能避免反复冻融，否则会降低病毒滴度。亚载提供的慢病毒的滴度单位是TU/ml (transduction units/ml) ，即每毫升中含有具有生物活性的慢病毒颗粒数。如：慢病毒滴度为 1E+8 TU/ml，即每毫升病毒液中含有1E+8个具有生物活性的慢病毒颗粒。

五、慢病毒使用安全注意事项有哪些？

1.病毒操作时建议使用生物安全柜。 如果使用普通超净工作台操作病毒，请不要打开排风机；

2.病毒操作时请穿实验服，带口罩和手套；操作病毒时特别小心不要产生气雾或飞溅。如果操作时超净工作台有病毒污染，请立即用1%的SDS溶液擦拭干净；

3.如需要离心，应使用密封性好的离心管，或者用parafilm膜封口后离心，而且尽量使用组织或细胞培养室内的离心机；

4.用显微镜观察细胞感染情况时应遵从以下步骤：拧紧培养瓶或盖紧培养板，用70%乙醇清理培养瓶外壁后拍照，离开显微镜实验台之前，用70%乙醇清理显微镜载物台；

5.废弃的含过病毒的培养基中加入84消毒液（1:20左右），浸泡一天后丢弃。接触过病毒的枪头，离心管，培养板等其他物品可用84消毒液稀释液处理，也可以用煮沸处理半小时或常规湿热灭菌（121℃，20 min）；

6.实验结束后，用肥皂和水清洗双手。