细胞凋亡

技术原理

细胞凋亡中染色体DNA的断裂是个渐进的阶段性过程。染色体DNA首先在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300 kb的大片段，然后大约30%的染色体DNA在Ca²⁺和Mg²⁺依赖的核酸内切酶作用下，在核小体单位之间被随机切断，形成180-200 bp核小体DNA多聚体。因此在细胞凋亡晚期，DNA会被降解为180-200 bp的片段，断裂的基因组DNA上暴露出大量的3'-OH末端。末端脱氧核糖核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）是一种不依赖于模板的DNA聚合酶，可以催化脱氧核苷酸结合到断裂的DNA分子3'-OH末端。因此TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling)细胞凋亡检测试剂盒可以用来检测组织细胞在凋亡晚期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是在TdT酶的作用下，在基因组DNA断裂时暴露出的3´-OH末端掺入荧光素标记的dUTP（FITC-12-dUTP），从而可以用荧光显微镜或流式细胞仪检测（FITC激发450-500 nm，发射515-565 nm）

实验方法

Step1：细胞培养

Step2：转染或药物处理

Step3：细胞收集

Step4：加tunel试剂

Step5：荧光检测

案例展示

    组织TUNEL-IF染色

需确认的信息

1. 是检测细胞凋亡还是组织凋亡

2. 凋亡的具体检测手段，是TUNEL还是流式检测或者其他检测方式

3. 样本数量为多少