蛋白修饰位点分析

实验原理

先通过IP得到目的蛋白，再通过SDS-PAGE对目的蛋白进行分离纯化，将胶条上目的蛋白对应的条带切下进行胶内酶解和高灵敏度的液质联用分析(LC-MS/MS)，通过数据库检索得到蛋白上的修饰位点。

蛋白分析的应用

1. 磷酸化：信号转导、细胞周期、生长发育及癌症机理等；

2.糖基化：蛋白质折叠、更新以及免疫应答等；

3.乙酰化：基因表达调控、细胞凋亡、细胞代谢、蛋白质稳定性以及神经退行性病变等；

4.泛素化：细胞周期、细胞凋亡、转录调控、DNA修复以及信号转导等；

5.甲基化：染色质结构及转录调控等；

6.丙酰化 / 丙二酰化 / 戊二酰化 / 琥珀酰化：主要存在于线粒体和细菌中，与代谢过程密切相关。

实验流程

1.IP溶液/胶条；

2.蛋白酶消化；

3.LC-MS/MS分析；

4.搜库后分析，蛋白鉴定、翻译后修饰分析。

实验完成周期及交付标准

1. 周期：6周左右

2. 交付标准：质谱原始数据、白鉴定列表、肽段信息表、实验报告（主要仪器、试剂和实验方法）

需确认的信息

1. 样品：如果样品为蛋白质溶液，蛋白质总量≥300mg; 如果是组织样品，样品总量≥0.1g； 如果是细胞样品，细胞数量≥107个；如果是体液样品，血清≥200ml，脑脊液≥200ml，尿液≥1ml，泪液≥1ml；

2. 样品采集过程中使用到塑料制品时，尽量使用无色进口产品，以减少塑料制品中杂质对质谱检测的影响；

3. 确认样品所属种属、分析需求。