石蜡/冰冻切片TUNEL凋亡

TUNEL凋亡显色法

细胞凋亡中染色体DNA的断裂是个渐进的阶段性过程。染色体DNA首先在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300 kb的大片段，然后大约30%的染色体DNA在Ca2+和Mg2+依赖的核酸内切酶作用下，在核小体单位之间被随机切断，形成180-200 bp核小体DNA多聚体。因此在细胞凋亡晚期，DNA会被降解为180-200 bp的片段，断裂的基因组DNA上暴露出大量的3'-OH末端。末端脱氧核糖核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）是一种不依赖于模板的DNA聚合酶，可以催化脱氧核苷酸结合到断裂的DNA分子3'-OH末端。因此TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling)细胞凋亡检测试剂盒可以用来检测组织细胞在凋亡晚期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是在TdT酶的作用下，在基因组DNA断裂时暴露出的3´-OH末端掺入生物素标记的dUTP（Biotin-dUTP），随后用辣根过氧化物酶（Horse-radish peroxidase，HRP）标记的链霉亲和素（Streptavidin）(Streptavidin-HRP, SA-HRP)，检测被生物素（Biotin）标记的DNA末端，最后通过加入HRP的底物混合液（DAB）进行显色反应，使得凋亡细胞的细胞核被染成棕黄色，从而可以用普通光学显微镜检测。

实验流程

结果展示

实验完成周期及交付标准

1. 实验周期：2-3周

2. 交付标准：蜡块、切片、染色图片、实验报告（实验步骤、试剂、耗材等）

需确认的信息

1. 样本的种属

2. 样本的类型（固定的组织or蜡块or切片）

3. 是否提供试剂盒

4. 拍照要求