TUNEL-IF凋亡荧光法

TUNEL凋亡荧光法

胞凋亡中染色体DNA的断裂是个渐进的阶段性过程。染色体DNA首先在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300 kb的大片段，然后大约30%的染色体DNA在Ca2+和Mg2+依赖的核酸内切酶作用下，在核小体单位之间被随机切断，形成180-200 bp核小体DNA多聚体。因此在细胞凋亡晚期，DNA会被降解为180-200 bp的片段，断裂的基因组DNA上暴露出大量的3'-OH末端。末端脱氧核糖核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）是一种不依赖于模板的DNA聚合酶，可以催化脱氧核苷酸结合到断裂的DNA分子3'-OH末端。因此在TdT酶的作用下，在基因组DNA断裂时暴露出的3´-OH末端掺入荧光素标记的dUTP（FITC-12-dUTP），从而可以用荧光显微镜或流式细胞仪检测（FITC激发450-500 nm，发射515-565 nm）。

实验流程

结果展示

                                              merge                                                                                        DAPI                                                                          TNUEL-IF

实验完成周期及交付标准

1. 实验周期：2-3周

2. 交付标准：蜡块、切片、染色图片、实验报告（实验步骤、试剂、耗材等）

需确认的信息

1. 样本的种属及类型（组织or细胞）

2. 样本的类型（固定的组织or蜡块or切片）

3. 拍照要求